Xét nghiệm elisa là gì
ELISA là một nghệ thuật được sử dụng đa số trong miễn dịch học, vận dụng rộng rãi trong những ngành y học, thực phẩm, NNTT,… Trong y học, nghệ thuật ELISA được vận dụng trong các xét nghiệm HIV, những dịch viêm gan vô cùng vi tốt các bệnh lý lây nhiễm cam kết sinch trùng,…
1.Nguim lý kỹ thuật ELISA
ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent assay) là 1 trong những phương thức sinh hoá sử dụng chủ yếu trong miễn kháng học để phát hiện tại sự hiện diện của một kháng thể hoặc phòng nguim trong một chủng loại.Bạn đang xem: Xét nghiệm elisa là gì
Hình 1: Ngulặng lý ELISA
Nguyên ổn lý của chuyên môn ELISA là phụ thuộc tính sệt hiệu chống nguyên ổn - chống thể với được triển khai bởi phần đông bước cơ bạn dạng sau: Kháng nguyên ổn - antiren (KN) hoặc Kháng thể - antibody toàn thân (KT) vẫn hiểu rằng thêm bên trên một giá chỉ thể rắn, tiếp nối mang lại mẫu bao gồm đựng phòng thể - antitoàn thân (KT) hoặc kháng ngulặng (KN) phải kiếm tìm vào giếng. Bổ sung thêm chống thể có đính thêm cùng với ezyme. Bước sau cùng thêm cơ chất (substance), enzyme đang biến đổi cơ chất này với chế tạo ra dấu hiệu màu sắc rất có thể xác minh được bằng máy đo huỳnh quang đãng.
2. Các phương pháp ELISA
ELISA thẳng (direct ELISA):
Pmùi hương pháp này thường sử dụng vào ELISA định tính, không nhiều sử dụng trong định lượng. Phương thơm pháp này còn có ưu điểm là chỉ việc một lần ủ cho nên vì thế tiết kiệm ngân sách thời gian với tối thiểu được Việc kiểm soát những điều kiện vào quy trình thực hiện (đổi khác ánh sáng cùng buffer cho từng lần ủ, tính thời gian…). Tuy nhiên, nhược điểm của chính nó là nhuộm màu nền (background staining) cao bởi vì sự liên kết không đặc hiệu của kháng thể với mặt phẳng rắn và các protein thắt chặt và cố định bên trên bề mặt rắn. Việc đánh dấu từng một số loại kháng thể áp dụng cho mỗi chống nguyên cũng tương đối tốn kém, độc nhất vô nhị là khi nên chẩn đân oán một trong những lượng to những một số loại kháng nguim không giống nhau.
ELISA con gián tiếp (indirect ELISA):
Ưu điểm của cách thức này là độ nhạy cảm cao chỉ việc sinh sản một một số loại kháng phòng thể mang enzyme nhằm nhận thấy cho nhiều kháng nguyên khác nhau. Tuy nhiên nhược điểm của nó là tăng số bước tiến hành cho nên làm tăng câu hỏi kiểm soát các điều kiện, quá trình thực hiện xét nghiệm cùng kéo dài thời gian chẩn đoán thù.
ELISA sandwich:
Phương thơm pháp này có nhiều ưu thế vượt trội, thứ nhất là độ nhạy bén cao giảm được nhuộm màu nền và các phản ứng không đặc hiệu do đã thải trừ được hầu như những yếu tắc tạp, phản ứng được thực hiện tiện lợi hơn.
Hình 2: Các phương thức chuyên môn ELISA
ELISA cạnh tranh (competitive sầu ELISA)
ELISA đối đầu là phương pháp ELISA siêu công dụng mang lại định lượng các yếu tố hiện hữu vào chủng loại cùng với lượng nhỏ dại. ELISA đối đầu và cạnh tranh áp dụng một lượng kháng ngulặng thuộc một số loại cùng với phòng nguyên mà lại ta ao ước định lượng vào mẫu (kháng ngulặng cạnh tranh) mang đến phản nghịch ứng miễn kháng với một loại kháng thể quánh hiệu cố định và thắt chặt trên mặt rắn, sau đó đo lượng phòng nguyên tuyên chiến đối đầu và cạnh tranh này thông qua hoạt tính enzyme được liên kết cùng với nó. Kháng ngulặng tuyên chiến đối đầu và cạnh tranh càng hiện hữu những cho biết một số loại chống nguyên đó trong chủng loại càng ít cùng ngược chở lại.
3. Những điều cần để ý lúc triển khai chuyên môn ELISA
Do kỹ thuật ELISA là nghệ thuật miễn kháng chào bán tự động nên hiệu quả xét nghiệm sẽ ảnh hưởng ảnh hưởng những bởi các yếu tố như: nhỏ tín đồ, cách thức thao tác, chất hóa học, thiết bị so với. Để làm chủ chất lượng giỏi các nghệ thuật xét nghiệm ELISA đề xuất cần thực hiện hòa hợp tiến trình của từng các loại xét nghiệm.
3.1. Dụng vắt với hóa chất
- Ống nghiệm.
- Giá đựng ống thử.
- Micropipette bao gồm những thể tích khác biệt trường đoản cú 1^l cho 1000^l.
- Đầu type vật liệu nhựa gắn vào Micropipette.
- Giấy thnóng.
- Máy rửa giếng ELISA.
- Máy đọc ELISA.
- Bộ chất hóa học tất cả có:
+ Các tkhô nóng vật liệu bằng nhựa vẫn lắp phòng nguyên/chống thể + Dung dịch cọ.
+ Calibration + Chứng âm + Chứng dương.
+ Cộng thích hợp.
+ Cơ hóa học.
+ Dung dịch pha loãng huyết tkhô giòn.
+ Chất ngưng bội nghịch ứng.
3.2. Mẫu bệnh dịch phẩm
+ Sử dụng mẫu tiết tĩnh mạch máu được bỏ vào vào ống thử sạch sẽ không đựng chất kháng đông hoặc gồm cất chất chống đông (Heparin/EDTA) phụ thuộc vào thử dùng từng các loại xét nghiệm.
+ Mỗi mẫu mã tiết sẽ được nhằm vào các ống nghiệm riêng biệt bao gồm dán mã Barcode và tăm tiếng đầy đủ, có nắp đậy căn vặn kín.
+ Các mẫu huyết được bỏ vào hộp kín vận động về phòng xét nghiệm vào thời hạn nhanh nhất có thể.
Xem thêm: Nam, Nữ 2021 Mệnh Gì Hợp Màu Gì ? Mệnh Gì? Có Nên Sinh Con Năm 2021?
+ Thông thường những mẫu huyết để gia công các xét nghiệm ELISA đang định hình trong 12h sống ánh sáng phòng trường đoản cú trăng tròn - 25 ºC, nhiệt độ 2 - 8 ºC định hình vào 24 - 48h.
+ Tại phòng xét nghiệm các chủng loại ngày tiết sẽ tiến hành phân păn năn về Quanh Vùng thực hiện từng xét nghiệm riêng và mã hóa số mẫu theo từng các dịch vụ xét nghiệm để ngăn cản bài toán lây lan chéo cánh hoặc lầm lẫn mẫu căn bệnh phẩm.
3.3. Quản lý hóa học lượng
Kỹ thuật ELISA là kỹ thuật miễn dịch buôn bán tự động hóa đến cho nên việc làm chủ unique vào quy trình làm cho xét nghiệm đóng góp một phương châm vô cùng đặc biệt. Cần thiết đề nghị đưa ra phần đa quá trình điều hành và kiểm soát quality chặt chẽ tại từng bước một thực hiện:
+ Trước xét nghiệm: Mẫu căn bệnh phẩm buộc phải đạt yêu cầu không được vỡ vạc hồng huyết cầu, không lan truyền khuẩn, độ đậm đặc ngấn mỡ huyết cao cũng tác động đến hiệu quả xét nghiệm.
+ Trong xét nghiệm: Thực hiện Calibration với Control trong mỗi lần thực hiện mẫu mã theo đúng kinh nghiệm của từng bộ kkhông nhiều xét nghiệm.
+ Sau xét nghiệm: Kết quả mẫu người bị bệnh chỉ được đồng ý Khi mặt đường Calibration với Control vào cùng một lần thực hiện đạt tác dụng giỏi. Kết quả sau khi thực hiện đối chiếu kết thúc nên thực hiện các ứng dụng ghi nhấn hiệu quả trực tiếp, rời ghi thủ công bằng tay tạo sai số công dụng bởi vì nhầm lẫn lúc vào sổ.
3.4. Quy trình kỹ thuật
Thực hiện tại theo như đúng khuyên bảo ở trong nhà thêm vào.
Quy trình có công việc bao gồm sau đây:
Cách 1: Cho mẫu bệnh nhân, bệnh âm, chứng dương vào giếng vật liệu nhựa đã gắn thêm sẵn chống nguyên/kháng thể. Ủ ngơi nghỉ ánh sáng phòng hoặc 37 ºC, thời gian ủ theo phía dẫn của phòng thêm vào.
Cách 2: Rửa các giếng bằng hỗn hợp đệm PBS - Tween đôi mươi, thnóng giấy mang lại ráo nước.
Cách 3: Cho cộng thích hợp vào từng giếng, ủ ngơi nghỉ ánh nắng mặt trời chống hoặc 37 ºC, thời hạn ủ theo hướng dẫn của phòng cung cấp.
Bước 4: Rửa những giếng bởi hỗn hợp đệm PBS - Tween trăng tròn, thnóng giấy đến ráo nước.
Cách 5: Cho cơ chất vào từng giếng, chờ cho màu sắc mở ra (15 - 30 phút).
Cách 6: Cho dung dịch dừng phản bội ứng.
Cách 7: Đọc tác dụng sử dụng máy hiểu ELISA từ bỏ động
Hình 3: Phản ứng ELISA sandwich
Tóm lại trong mỗi bước của quy trình chuyên môn ELISA đều có tác dụng ảnh hưởng mang lại kết quả xét nghiệm trường hợp nhỏng bạn kỹ thuật viên thực hiện không làm cho vừa lòng quy trình sẽ kiến tạo. Các nhân tố nguy cơ tiềm ẩn giỏi gặp gỡ có thể dẫn mang lại sai số tác dụng là:
+ Hóa hóa học ko nhằm bất biến sinh sống nhiệt độ chống trước khi làm xét nghiệm.
+ Hút ít sai thể tích mẫu mã pha loãng, không đúng thể tích dung dịch test.
+ Thời gian ủ và ánh sáng ko đúng: khiến cõi âm hoặc dương tính trả.
+ Rửa ko sạch: đề nghị sử dụng lắp thêm rửa tự động để bảo đảm đầy đủ thể tích nước cọ và tần số cọ, không thấm khô ktốt mẫu sau khi cọ xong.
+ Không gọi công dụng tức thì sau khoản thời gian giới hạn bội phản ứng.
3.5. Biện luận kết quả
- Ngưỡng dương tính hoàn toàn có thể khác biệt đối với từng loại xét nghiệm. Biện luận kết quả dựa vào ngưỡng dương tính vị công ty sản xuất chỉ dẫn.
- Các kỹ thuật miễn kháng vạc hiện nay phòng thể mang lại công dụng loại gián tiếp, không có quý giá tuyệt đối.
- Kết quả âm tính cũng không đào thải trọn vẹn ko nhiễm căn bệnh, hoàn toàn có thể vì chưng bắt đầu bị lây nhiễm, hoặc bị nhiễm quá lâu, hoặc lượng chống nguyên/chống thể thừa ít nhằm rất có thể vạc hiện được bởi cách thức ELISA. Trong ngôi trường thích hợp nghi ngại mắc căn bệnh bên trên lâm sàng đề nghị làm cho lại xét nghiệm sau 1-2 tuần. Xét nghiệm vài lần nhằm quan sát và theo dõi biến động của kháng thể/ chống ngulặng có giá trị rộng là xét nghiệm một lượt. Nếu yêu cầu, buộc phải kiểm tra lại bằng những kỹ thuật không giống.
- Kết trái dương tính cũng không xác minh trọn vẹn vày hoàn toàn có thể dương tính mang bởi vì bội phản ứng chéo cánh thân những loại ký sinch trùng hoặc căn cơ khiến bệnh dịch.
Vì vậy, các bội phản ứng miễn dịch kiếm tìm phòng nguyên/phòng thể quan yếu thay thế sửa chữa trọn vẹn xét nghiệm thẳng trong chẩn đoán ngulặng nhân bệnh. Kết trái xét nghiệm, dù âm tuyệt dương, cũng rất cần được lưu ý một phương pháp cẩn trọng, kết hợp với các yếu tố dịch tễ hoặc số đông xét nghiệm bổ sung cập nhật khác (sinc học phân tử, nuôi ghép tế bào…) cùng gần như cung cấp phi lâm sàng khác (XQ, rất âm…).
Xem thêm: "You Are Very Nice Nghĩa Là Gì Trong Tiếng Anh? ? Very Nice Việt Làm Thế Nào Để Nói
Với đội hình chuyên gia, bác sĩ tay nghề cao, khối hệ thống máy móc tân tiến tương tự như tiến trình cai quản unique nghiêm nhặt (theo tiêu chuẩn ISO 15189:2012), chuyên môn ELISA được thực hiện trên Bệnh viện Đa khoa thanglon.com luôn luôn đảm bảo an toàn kết quả xét nghiệm sớm nhất có thể, chính xác độc nhất. Mọi thắc mắc xin liên hệ tổng đài 1900 565656 sẽ được tư vấn với giải đáp.